"Tantei Opera Milky Holmes" ist eine Anime-Serie, die in einer Welt spielt, in der bestimmte Menschen über sogenannte "Toys" verfügen – übernatürliche Fähigkeiten, die ihnen bei der Lösung von Verbrechen helfen. Die Geschichte konzentriert sich auf vier junge Detektivinnen, die gemeinsam das Detektivteam Milky Holmes bilden: Sherlock Sherringford, Nero Yuzurizaki, Elly Cunningham und Cordelia Glauca. Jede von ihnen besitzt ein einzigartiges Toy, das ihnen bei ihren Ermittlungen hilft. Sherlock kann Gegenstände anziehen, Nero hat übermenschliche Kraft, Elly kann Gedanken lesen, und Cordelia kann sich unsichtbar machen.

Die Serie beginnt damit, dass die vier Mädchen an der Holmes Detective Academy studieren, einer Schule, die angehende Detektive ausbildet. Sie gelten als talentiert und erfolgreich, bis sie eines Tages ihre Toys verlieren, nachdem sie gegen die berüchtigten Diebesgruppe "Gentlemen Thieves" antreten. Ohne ihre Fähigkeiten müssen sie sich nicht nur mit ihrem plötzlichen Statusverlust auseinandersetzen, sondern auch mit den Herausforderungen des Alltags, die nun viel schwieriger zu bewältigen sind.

Im Laufe der Serie versuchen die Mädchen, ihre Toys zurückzugewinnen, während sie weiterhin versuchen, als Detektivinnen zu arbeiten. Dabei geraten sie in zahlreiche skurrile und humorvolle Situationen, die oft von Slapstick und absurden Komödienelementen geprägt sind. Gleichzeitig müssen sie sich mit den Gentlemen Thieves auseinandersetzen, die weiterhin Verbrechen begehen und die öffentliche Ordnung bedrohen. Die Serie verbindet Elemente des Mystery-Genres mit einer leichten, oft parodistischen Herangehensweise an das Detektivgenre.

Die Charaktere sind stark stereotypisiert, was zur humorvollen Dynamik der Serie beiträgt. Sherlock ist die selbsternannte Anführerin, oft überheblich, aber gutherzig. Nero ist impulsiv und liebt Essen, während Elly als ruhige und intelligente Figur dargestellt wird. Cordelia hingegen ist die naive und kindliche Figur des Teams, die oft für komische Momente sorgt. Die Gentlemen Thieves, bestehend aus Arsène, Twenty, Hercule und Stone River, dienen als wiederkehrende Antagonisten, deren Interaktionen mit Milky Holmes oft von Rivalität und Situationskomik geprägt sind.

Die Handlung entwickelt sich episodisch, wobei jede Folge neue Rätsel oder Herausforderungen präsentiert, die das Team bewältigen muss. Dabei wird oft die Absurdität der Situationen betont, was die Serie zu einer humorvollen und leicht zugänglichen Unterhaltung macht. Trotz des Fokus auf Komik gibt es auch Momente, in denen die Charaktere wachsen und ihre Freundschaft sowie ihren Teamgeist stärken.