Die OVA "Akiba Girls" spielt in der pulsierenden Elektronik- und Otaku-Kultur des Stadtteils Akihabara in Tokio. Die Handlung dreht sich um drei junge Frauen – Aoi, Rin und Yū –, die in einem kleinen Elektronikgeschäft arbeiten. Jede der Protagonistinnen verkörpert einen bestimmten Aspekt der Otaku-Kultur: Aoi ist eine begeisterte Gamerin, Rin eine leidenschaftliche Cosplayerin, und Yū interessiert sich vor allem für Anime und Manga. Ihre gemeinsame Leidenschaft für die Subkultur Akihabaras verbindet sie, während sie im Alltag mit den Herausforderungen des Arbeitslebens und ihren persönlichen Interessen jonglieren.

Die Handlung folgt den drei Frauen bei ihren täglichen Abenteuern in Akihabara, wobei sie oft in humorvolle und manchmal absurde Situationen geraten. Ein wiederkehrendes Element ist ihr Versuch, das Geschäft vor dem finanziellen Ruin zu bewahren, während sie gleichzeitig ihre individuellen Hobbys und Träume verfolgen. Dabei treffen sie auf eine Vielzahl von Charakteren, die die bunte und vielfältige Welt Akihabaras repräsentieren, darunter andere Otaku, Geschäftsleute und gelegentlich auch skurrile Persönlichkeiten.

Die OVA nutzt die Kulisse Akihabaras, um die Atmosphäre und die Besonderheiten des Stadtteils einzufangen, wobei die Handlung oft zwischen Slapstick-Komödie und alltäglichen Momenten wechselt. Die Charaktere entwickeln sich im Laufe der Geschichte weiter, wobei ihre Freundschaft und ihr gemeinsamer Einsatz für das Geschäft im Mittelpunkt stehen. Die Handlung bleibt leicht und unterhaltsam, ohne tiefgreifende Konflikte, und konzentriert sich stattdessen auf die Darstellung der Otaku-Kultur und des Lebens in Akihabara.