Josephine "Jo" March, die zweitälteste Tochter der Familie March, lebt in der Nähe von Gettysburg während des Amerikanischen Bürgerkriegs. Die Abwesenheit ihres Vaters im Militärdienst belastet die Haushaltsfinanzen, weshalb Jo Arbeit sucht. Zunächst hilft sie ihrer strengen Großtante Marta March, die Jos unkonventionelle Art missbilligt. Später sichert sich Jo eine Stelle bei einer Zeitung in Newcord, mit dem Ziel, ihre Belletristik zu veröffentlichen, obwohl sie Kritik vom Redakteur Anthony erhält.

Entgegen den gesellschaftlichen Erwartungen an Weiblichkeit zeigt Jo einen jungenhaften und offenen Charakter, geprägt von einem hitzigen Temperament. Dies führt oft zu Konflikten mit ihrer jüngsten Schwester Amy, die gipfeln, als Amy aus Bosheit Jos Manuskripte verbrennt – ein Riss, der ihre Bindung vorübergehend zerstört. Versöhnung findet statt, als Jo Amy rettet, nachdem diese beim Verfolgen von Jo und Laurie ins dünne Eis eingebrochen ist. Jos beschützende Natur gilt besonders ihrer schwächlichen Schwester Beth; sie pflegt Beth durch ein beinahe tödliches Scharlachfieber, das sich Beth bei der Hilfe für eine arme Familie zuzieht. Obwohl Beth überlebt, bleibt sie dauerhaft geschwächt, ein Ergebnis, das Jo zutiefst trifft.

Finanziell pragmatisch verkauft Jo ihr langes Haar – ihre "einzige Schönheit" –, um die dringende Reise ihrer Mutter nach Washington zu finanzieren, als Mr. March ernsthaft erkrankt, und lehnt Hilfsangebote von Tante March und Mr. Laurence ab. Ihre familiäre Loyalität verbindet sich mit literarischem Ehrgeiz; sie schreibt vor allem Geschichten, um Beth zu unterhalten, die ihre Muse ist. Nach Beths Niedergang und Tod erlebt Jo eine kreative Blockade, verbrennt alte Manuskripte und verarbeitet schließlich ihre Trauer, indem sie einen ernsthaften Roman schreibt, der Beth gewidmet ist.

Jo schließt eine enge Freundschaft mit Theodore "Laurie" Laurence, dem Enkel ihres Nachbarn, mit dem sie Abenteuer und Geheimnisse teilt. Laurie entwickelt romantische Gefühle, doch Jo lehnt seinen Heiratsantrag ab, da sie ihn nur als Bruder sieht. Daraufhin reist er mit seinem Großvater nach Europa. Während ihrer Tätigkeit als Gouvernante in New York trifft Jo Professor Friedrich Bhaer; er kritisiert ihre reißerischen Schriften, und obwohl sich gegenseitiger Respekt entwickelt, wird in der Anime keine romantische Beziehung gezeigt.

Ihre Karriere entwickelt sich von Trivialliteratur hin zur Vollendung eines Romans, inspiriert von ihrer Familie. Ein Verleger besteht darauf, dass die Heldin heiratet, um kommerziellen Erfolg zu sichern, doch der Anime betont Jos Fokus auf literarische Leistung. In den letzten Folgen zieht sie mit Anthony nach New York, um im Journalismus Fuß zu fassen, wobei romantische Lösungen offen bleiben. Die Handlung enthüllt, dass Laurie schließlich Amy heiratet und damit Jos Schwager wird.

Körperlich ist Jo groß und schlank mit grauen Augen, einer "lustig aussehenden" Nase und anfangs ungebändigtem langem braunem Haar, das später kurz geschnitten wird. Ihre Bewegungen sind oft unbeholfen, ähnlich einem "Fohlen". Mit zunehmender Reife mildert sich ihr Äußeres; sie bekommt Kurven und bewegt sich mit mehr Anmut.

Jo